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    什么是ATCC細胞?如何使用它?

    發(fā)布時間: 2022-10-22  點擊次數(shù): 2485次
      ATCC細胞的原理在不加任何條件下直接凍存細胞時,細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶,能導(dǎo)致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑,可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
     
      細胞復(fù)蘇時速度要快,使之迅速通過細胞最易受損的-5~0℃,細胞仍能生長,活力受損不大。目前常用的保護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細胞。
     
      ATCC細胞的使用方法:
      1、您收到細胞后,請按照以下方法進行操作:
      取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或隔夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。然后,用75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,收集瓶內(nèi)液體于50ml離心管中,1000rpm離心5min,棄上清,用6ml*培養(yǎng)基重懸,全部接種到25cm2培養(yǎng)瓶中,再放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果離心后細胞量很多,可以直接1:2分瓶培養(yǎng)。
      2、細胞傳代:細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時,收集瓶內(nèi)液體于15ml離心管中,1000rpm離5min,棄上清,用12ml*培養(yǎng)基重懸細胞,按1:2的比例進行接種傳代,接種到25cm2培養(yǎng)瓶中,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),2-3天更換培養(yǎng)液。換液的步驟同細胞NK-92細胞,ATCC細胞,培養(yǎng)技術(shù)傳代步驟。
      3、細胞凍存:
      a、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時,收集瓶內(nèi)液體于15ml離心管中,1000rpm離心5min,棄上清,用適當量的凍存液(基礎(chǔ)培養(yǎng)基:FBS:DMSO=5:4:1)重懸細胞,并放置于凍存管中。
      b、先將細胞凍存管放置于4℃0.5h,再放置于-20℃1.5h,然后將其移入-80℃隔夜,24h后可轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。
      4、細胞復(fù)蘇:
      a、從液氮中取出細胞凍存管,快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。
      b、將凍存管中的細胞移至含有5ml*培養(yǎng)液的15ml離心管中,然后1000rpm/min,離心5min。
      c、棄上清,沉淀細胞用6ml*培養(yǎng)基重懸,接種到培養(yǎng)瓶中,zui后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
      d、第二天,換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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